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荧光显微镜标本样品的处理

更新时间:2011-08-18点击次数:505

一、石蜡切片的过程:

1、取材:刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm,大小1.5×1.5×0.2~0.3cm为宜.取材时间越快越好.

2、固定:组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.

注意:①固定液量应为组织块体积的40倍.

②固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小,温度等有关.一般为3—24h.

③固定温度大多可在室温固定,在低温(4℃)时间应延长.

④固定容器应大些.

3、漂洗:流水冲洗2—10h.

4、脱水:从低浓度酒精到高浓度酒精.

70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’).

5、透明:组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂,而使石蜡进入组织块.常用二甲苯,一般浸泡30m即可.

6、浸蜡:组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡.一般需经2—3次浸渍才能完成,总时间为3—4h.用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.

7、包埋:先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入.包埋面必须平整.包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.

8、切片:修块→切片→展片→捞片→烤片.也可作冰冻切片.

二、荧光染料的配制:

储藏液:1mg/mldapi(DMSO、去离子水、pbs都可以溶解)

工作液:通常1μg/ml

染色时须避光,10min左右

用pbs冲去多余染液即可观察。



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