倒置显微镜应用

主要仪器与试剂①倒置显微镜（目镜中带有计数框）。②样品沉淀器由沉降柱③血球计数器。④合哥氏溶液。

试验方法

①样品的采集及保存

水样采集后用鲁哥氏溶液保存，100 m1.水样加1mL兽哥氏溶液并置于暗处。

②样品沉淀

将沉降柱置于沉降板上，使沉降柱口与沉淀室口吻合，取1-20 mL水样注入沉降柱（操作时不要形成旋涡），然后加蒸馏水至沉降柱口，用玻片将沉降柱口封好尽量避免有气泡产生。将沉淀器静置4 h使水样沉淀，移动沉淀器时要注意避免沉淀物非随机分布。

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奥林巴斯显微镜

③样品检测

用玻片推去沉降柱及其中的上清液并将玻片盖于沉淀室上，注意沉淀室内不能有气泡产生。将沉淀室放入显微镜载物台，用目镜中的计数框进行长条计数，统计经过方框内的藻类数量。随机抽取沉淀室底板3-5条或对整个沉淀室进行计数，直到优势种类的计数X100个/mL。

变异系数

在水样体积及计数条带相同的前提下，倒置显微镜计数法的变异系数比血球计数法小.样品E的变异系数较大是由于其优势种类为微囊藻，微囊藻具有伪空泡不易被沉淀，此外通常微囊藻群体中有大量的细胞个体，在计数时很容易产生误差。而采用血球计数法是由于细胞密度大，且不易出现大的群体，故变异系数较小。

准确度

采用倒置显微镜计数法时对整个沉淀室（（s咖3IIlIll）进行随机抽样，而血球计数法仅对1 nm3的样品室进行抽样，可见在选择了恰当的水样体积和计数条带数后，倒置显微镜计数法可达到较高的准确度，而血球计数法只有当水样中含有的浮游藻类密度非常高时才能得出统计学上可靠的数据。在检测的5个样品中，除E外，其他4个样品采用倒置显微镜计数法检出的平均藻类总数高于血球计数法的结果（由于E中微囊藻细胞密度过大及其种属特性，在沉淀室中微囊藻细胞个体处于不同的层面，计数时很容易产生误差）。

由此可见，倒置显微镜计数法可检出样品中的大多数种属，能较为全面地反映样品的种群分布情况，有利于对湖泊或水库作进一步研究。而血球计数法仅能检出水样中占优势的1-2个种群，一些常见的、数量较少的种属则无法检出。

采用倒置显微镜计数法检测水中的浮游藻类，水样量小、准确度高、变异系数小，能较为全面地反映样品的种类分布情况，且操作简单易行。检测中应注意以下几方面:移去上清液时沉淀室内不能有气泡存在，以免影响计数结果;移动沉淀室时要避免倾斜，以免造成藻类在沉淀室底板非随机分布;选取适当的水样体积及计数条带以获得较高的准确度。