激光捕获显微切割显微镜（LaserCaptureMicrodissection,LCM）是一种用于从组织切片中精准地分离和收集特定细胞或组织区域的技术。它结合了激光技术和显微镜的优势，广泛应用于分子生物学、基因组学、转录组学等领域。其主要技术步骤如下：
1.样本准备
组织切片制备：将待分析的组织或细胞样本切成薄片（通常为5–10μm厚），并放置在适当的载玻片上。通常使用冷冻切片机或石蜡切片机进行切割。切片后，组织可以进行染色，以帮助区分不同的细胞类型或组织结构。
固定与染色：样本需要经过适当的固定（如使用甲醛或酒精固定）以防止组织退化，并根据实验需求进行染色。常见的染色方法有H&E染色、免疫组织化学染色等。
2.显微镜设置
显微镜调节：使用激光捕获显微切割显微镜的显微镜部分，首先调整显微镜的放大倍率，确保能清晰地观察到目标细胞或组织区域。
激光设置：根据需要设置适当的激光功率和焦距，以确保激光能够精准地切割目标区域。激光波长通常在紫外或红外范围内，可以与不同的样本类型进行兼容。
3.激光捕获与切割
定位目标区域：通过显微镜实时观察，定位需要捕获的目标区域。操作人员可以通过图像来确定目标区域的形状和大小，并确保其周围区域清晰可见。
激光切割：使用激光束直接切割目标区域的组织。激光切割过程会将切割的组织区域加热，形成蒸汽压力，进而分离该区域。激光可精确地去除目标细胞或组织，避免损伤周围细胞。
4.组织捕获
捕获目标细胞或区域：在激光切割的同时，通常会使用一种透明的聚合物膜（例如聚乙烯醇膜）或直接在切片上进行激光加热，使目标组织与载玻片分离，并将其粘附到采集膜或目标板上。
收集切割区域：被切割的组织通过激光系统被收集到微小的塑料捕获帽或收集杯中，通常这些容器可以包含用于进一步分析的溶液。
5.后处理与分子分析
RNA/DNA/蛋白质提取：捕获的细胞或组织区域通常会被用于进一步的分子生物学分析，例如RNA、DNA或蛋白质的提取。这些提取物可用于qPCR、基因组测序、RNA-seq、Westernblot等实验。
数据分析：通过对提取物的进一步分析，研究人员可以获得关于目标细胞群体或区域的详细分子信息，如基因表达谱、突变分析等。
6.数据解读与验证
分析数据：通过高通量技术（如基因表达芯片、RNA-seq等），可以获得被捕获细胞的分子特征，进行差异分析或功能注释。
验证实验：通常会进行验证实验，如免疫荧光染色、原位杂交等，以验证激光切割获取的样本是否代表了目标区域或细胞的特征。
注意事项：
样本质量：为了获得高质量的捕获样本，切片时的厚度、染色质量、组织的固定及切割方法都需要非常精确。
激光能量控制：激光能量的过高可能会损伤周围组织，因此在操作时需要特别注意控制激光功率。
总结来说，激光捕获显微切割显微镜技术通过精确地定位和切割目标细胞或组织区域，结合高效的分子分析，帮助研究人员获取特定组织的高质量样本，进行深度分析。
更新时间：2025-06-16
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